根据第十九届湖南医学科技奖申报要求，现对湖南爱尔眼视光研究所作为第二完成单位、徐和平作为第二完成人参与的项目“普罗布考调控SP1-Nrf2-ARE通路抗糖尿病视网膜病变”进行公示，公示期：2022年6月14日至2022年6月22日，公示期内如对公示内容有异议，请您向湖南爱尔眼视光研究所（aovs@aierchina.com）反映。
湖南爱尔眼视光研究所
2022年6月14日
公示内容如下：
拟推荐第十九届湖南医学科技奖候选项目公示
1.项目名称
普罗布考调控SP1-Nrf2-ARE通路抗糖尿病视网膜病变
2.推荐单位
长沙市医学会
3.推荐意见：
准予推荐
4.项目简介
目的：本研究旨在探究普罗布考(PB)对高糖诱导的人Müller细胞氧化损伤的拮抗作用，阐明普罗布考通过SP1-Keap1-Nrf2-ARE信号通路抗糖尿病视网膜病变（DR）的分子机制，为临床应用PB防治DR提供新的理论依据。
方法：组织块悬浮法原代培养人Müller细胞，用谷氨酰胺合成酶（GS）抗体通过免疫荧光染色法鉴定Müller细胞。利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性，DCFH-DA探针检测细胞内ROS水平，流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫荧光染色法、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分别检测Müller细胞中SP1、Keap1、Nrf2及GCLC蛋白和mRNA的表达。使用C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病小鼠模型，光学相干断层扫描(OCT)、眼底照相(FP)和眼底荧光血管造影(FFA)评估小鼠视网膜结构和损伤情况，苏木精-伊红染色检测视网膜组织病理改变。
结果：
（1）普罗布考能够抑制人视网膜Müller细胞内ROS的产生，促进细胞增殖，并减少高糖诱导的Müller细胞的凋亡。对于正常血糖组、高血糖组、高血糖+普罗布考组，各组细胞增殖试验中各组OD值分别为：0.98±0.23、0.58±0.11、0.73±0.11；细胞凋亡率分别为：（2.79 ± 0.52）%、（7.70 ± 0.44）%、（4.00 ± 0.95）%；ROS检测荧光值分别为：20.89±5.14、55.17±14.07、26.28±4.73。与正常血糖组相比，高血糖组OD值明显下降, Müller细胞凋亡率增加，而Müller细胞内ROS水平明显升高；与高血糖组相比，高血糖+普罗布考组OD值明显增加, 细胞凋亡率显著降低，细胞内ROS水平明显降低。
（2）普罗布考通过抑制高糖诱导Müller细胞中SP1、Keap1的表达，上调Müller细胞中Nrf2、GCLC的表达，发挥抗氧化作用。免疫荧光化学染色结果显示人Müller细胞中SP1、Keap1、Nrf2、GCLC蛋白均呈阳性表达。qRT-PCR结果显示，与正常血糖组相比，高血糖组Müller细胞中SP1、Keap1、Nrf2mRNA表达显著上调，GCLC显著下调，差异均有统计学意义。与高糖组相比，高血糖+普罗布考组Müller细胞中SP1、Keap1mRNA表达显著下调，Nrf2、GCLC的mRNA表达显著上调，差异均有统计学意义。
（3）普罗布考对于早期糖尿病小鼠视网膜损伤具有保护作用。与对照组视网膜相比，早期糖尿病小鼠的视网膜可见动脉反光增强以及静脉串珠样扩张，视网膜内层和中层厚度减小并且细胞核明显减少（P<0.05）；普罗布考治疗组小鼠网膜内层和中层厚度及细胞核数目均明显增加（P<0.05）。
5.知识产权证明目录
无
6.代表性论文目录
序号 | 论文专著名称/刊名/作者 | 年卷（期）页码 （xx年xx卷xx页） | SCI影响因子 | 他引次数 | 影响因子 |
1 | Probucol Prevents Diabetes-Induced Retinal Neuronal Degeneration through Upregulating Nrf2/BioMed Research International/Heng-Wei Liu;Yong Luo; Yu-Fan Zhou; Zhong-Ping Chen* | 2020, 3862509 | 3.411 | 4 | / |
2 | Higher aqueous levels of matrix metalloproteinases indicated visual impairment in patients with retina vein occlusion after anti-VEGF therapy/British Journal of Ophthalmology/Luo, Y; Wan, J; Luo, C; Liu, H; Zhou, Y; Xu, H*; Chen, Z* | 2019, (1468-2079) | 4.638 | 2 | / |
3 | Probucol promotes high glucose-induced proliferation and inhibits apoptosis by reducing reactive oxygen species generation in Muller cells/International Ophthalmology/Zhou, Xu-xia; Ai, Shi-Bei; Chen, Zhong-Ping*; Li, Chen-Xiang; | 2019, 39(12):2833-2842 | 2.031 | 9 | / |
4 | 普罗布考对高糖培养人视网膜Müller细胞特化蛋白1/细胞骨架相关蛋白/核因子E2相关因子2/半胱氨酸连接酶催化亚基表达的影响/中华眼底病杂志/李陈香, 艾诗蓓, 陈忠平, 周旭霞 | 2019,35(2): 187-191 | 1.17 | 0 | / |
5 | Higher Aqueous Levels of Resistin and Lipocalin-2 Indicated Worse Visual Improvement following anti-VEGF Therapy in Patients with Retinal Vein Occlusion/Current Eye Research/Luo, Y; Wan, JB; Luo, C; Liu, HW; Zhou, YF; Chen, J; Duan, YQ; Ning, XY; Zhou, ZC; Wang, KH; Li, J; Xu, HP; Chen, ZP | 2020,46(6):845-854 | 2.424 | 1 | / |
7.完成人情况，包括姓名、排名、职称、行政职务、工作单位、对本项目的贡献
排序 | 姓名 | 技术职务 | 行政职务 | 工作单位 | 对本项目的贡献 |
1 | 陈忠平 | 主任医师 | 眼底病科主任 | 爱尔眼科医院集团股份有限公司长沙爱尔眼科医院 | 参与项目相关课题的申报，项目的设计，项目实施部署，论文设计、修改，成果申报等；对创新点作出了巨大的贡献，论文1、2、3、4、5通讯作者，作为项目主持人顺利结题项目课题研究。 |
2 | 徐和平 | 主任医师 | 爱尔眼视光研究所荣誉所长 | 爱尔眼科医院集团股份有限公司，爱尔眼视光研究所 | 负责项目内容优化增进、论文设计及修改；论文2及论文5通讯作者。 |
3 | 刘蘅玮 | 医师 | 无 | 爱尔眼科医院集团股份有限公司长沙爱尔眼科医院 | 负责动物实验部分，部分论文设计、修改与发表，成果申报等，论文1第一作者。 |
4 | 罗用 | 医师 | 无 | 中南大学湘雅三医院 | 负责数据整理，部分论文设计、修改与发表，成果申报等，论文2及论文5第一作者。 |
5 | 周旭霞 | 医师 | 无 | 株洲三三一爱尔眼科医院 | 负责细胞实验部分，部分论文设计、修改与发表，成果申报等，论文3第一作者。 |
6 | 李陈香 | 医师 | 无 | 爱尔眼科医院集团股份有限公司长沙爱尔眼科医院 | 负责细胞实验部分，部分论文设计、修改与发表，成果申报等，论文4第一作者。 |
8. 完成单位情况，包括单位名称、排名，对本项目的贡献
爱尔眼科医院集团股份有限公司长沙爱尔眼科医院，排名第一，其拥有完全按国际化标准建设的实验设施，具备标准的细胞培养室、超净工作台等细胞培养所需设备，完全具备课题开展所需要的分子生物学和细胞生物学实验条件。协调各部门分工合作，发表高水平论文5篇，本单位对该研究有重要作用。
湖南爱尔眼视光研究所，排名第二，具备科学研究、设计、实验、测试及设备制造和改进的能力，其为本项目提供一定技术、设备、协调各部门分工合作，发表高水平论文1篇，对项目的顺利完成具有一定作用。
